<li id="r4p7v"></li>
    <li id="r4p7v"></li>

        <span id="r4p7v"></span>
      1. 當(dāng)前位置:

        首 頁 > 技術(shù)文章 > 關(guān)于免疫熒光染色和注意事項介紹
        產(chǎn)品搜索 Search
        目錄導(dǎo)航 Directory

        技術(shù)服務(wù)Article

        關(guān)于免疫熒光染色和注意事項介紹
        更新時間:2016-11-26 點(diǎn)擊次數(shù):3241次
          
          
          免疫學(xué)的基本反應(yīng)是抗原-抗體反應(yīng)。由于抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性,所以當(dāng)抗原抗體發(fā)生反應(yīng)時,只要知道其中的一個因素,就可以查出另一個因素。免疫熒光技術(shù)就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體(或抗原)上,與其相應(yīng)的抗原(或抗體)結(jié)合后,在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。
          
          免疫熒光染色
          
          (1)冰凍切片用0.01moULPBST(或PBS)漂洗或沖洗3次,每次5min。
          
          (2)3%H2O2孵育10min,再用0.01mol/LPBS沖洗3次,每次5min。
          
          (3)5%一8%的正常動物血清(山羊或馬血清)孵育30-60min。
          
          (4)洗掉血清,滴加一抗(0.01mol/LPBS配制),4℃過夜。
          
          (5)吸出一抗,0.01mol/LPBS沖洗3次,每次5min,加入熒光標(biāo)記的二抗(0.01mol/LPBS配制),4℃過夜。
          
          (6)吸出二抗,0.01mol/LPBS沖洗3次,每次10min。
          
          (7)封片劑封片,熒光顯微鏡觀察照相。典型的實(shí)驗結(jié)果見圖20.2B。
          
          注意事項:
          
          (1)由于熒光容易淬滅,一般僅能維持幾個小時,因此,熒光二抗應(yīng)避光保存,即從加入熒光二抗以后的步驟中都要盡量避光操作。封片后應(yīng)盡早照相,目前有市售的熒光增強(qiáng)劑,可使熒光在4℃保存1-2周仍不淬滅。
          
          (2)常用的熒光素有以下幾種,綠色熒光:FITC、AlexaFluor488和GFP;紅色熒光:TRITC、Cy3、AlexaFluor568&594和MitoTrackerRed;藍(lán)色熒光:Hoechst、DAPI;黃色熒光:YFP、Fluo-3和Rhoda-minel23等。
          
          (3)不同的熒光素激發(fā)的波長不同,因此,選用濾光片時要注意。一般紫外線的激發(fā)波長為334-365nm,藍(lán)光的激發(fā)波長為435-490nm,綠光的激發(fā)波長為546nm左右。
          
          (4)熒光顯微鏡應(yīng)提前至少15min打開汞燈預(yù)熱。關(guān)閉30min后方可再開啟。
          
          (5)免疫熒光的組織要求很高,載玻片及蓋玻片要干凈無雜質(zhì)。進(jìn)行熒光染色時,需注意染液的pH、濃度和染色溫度,還要避免對熒光有熄滅作用的物質(zhì)的接觸。組織和細(xì)胞也有自發(fā)熒光,如紅細(xì)胞中的血紅蛋白呈紅色熒光,維生素A呈綠色自發(fā)性熒光等。
        主站蜘蛛池模板: 久久国产福利免费| 特级毛片全部免费播放a一级| 亚洲成人在线电影| 亚洲伊人久久大香线焦| 老司机午夜免费视频| 女人18毛片免费观看| 国产亚洲精品自在久久| 亚洲人成网亚洲欧洲无码| 中文成人久久久久影院免费观看| 久草视频在线免费| MM131亚洲国产美女久久| 激情综合亚洲色婷婷五月APP| 一级免费黄色大片| 2020久久精品国产免费| 国产成人精品曰本亚洲79ren| 日韩在线观看视频免费| 无人影院手机版在线观看免费| 亚洲国产精品无码久久久蜜芽 | 精品国产一区二区三区免费| 女人毛片a级大学毛片免费| 亚洲午夜无码毛片av久久京东热| 男的把j放进女人下面视频免费| 免费黄色小视频网站| 亚洲成人高清在线观看| 黄页免费在线观看| 91亚洲精品第一综合不卡播放| 狠狠躁狠狠爱免费视频无码| 亚洲精品美女久久777777| 91av在线免费视频| 亚洲国产精品无码久久久秋霞2| 在免费jizzjizz在线播| 夜夜亚洲天天久久| 99久久国产精品免费一区二区| 亚洲精品国产自在久久| 曰批免费视频播放在线看片二| 女性自慰aⅴ片高清免费| 日韩在线视频播放免费视频完整版| 久久亚洲精品国产精品黑人| 在线观看无码AV网站永久免费| 羞羞视频免费观看| 亚洲一本综合久久|