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        分享細(xì)胞系的培養(yǎng)步驟
        更新時間:2022-09-27 點擊次數(shù):1028次
          細(xì)胞系是來自多細(xì)胞生物體的細(xì)胞群體,其通常不會無限增殖,但是由于突變,逃避了正常細(xì)胞的衰老,從而可以持續(xù)分裂的一種細(xì)胞的集合。
         
          因此,細(xì)胞可以在體外長時間生長。細(xì)胞系是研究多細(xì)胞生物體的生物化學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)的非常重要的工具,例如信號通路、腫瘤殺傷、細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、突變分析、基因表達(dá)、蛋白表達(dá)、細(xì)胞分化等等。此外,永生化的細(xì)胞系也已經(jīng)在生物技術(shù)中得到應(yīng)用,比如建立新來源、新突變的細(xì)胞系。
         
          培養(yǎng)步驟:
         
          1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中),培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
         
          2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
         
          1、對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
         
          1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
         
          2.加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。
         
          3.輕輕吹打細(xì)胞,*脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
         
          4.按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
         
          PS:若客戶收到2ml小管細(xì)胞,收到細(xì)胞后,用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi),嚴(yán)格無菌操作;將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度:若密度未超過80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),視情況傳代或者凍存。若密度超過80%,可直接進(jìn)行傳代(方法同上)。
         
          2、對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
         
          方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
         
          方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
         
          3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,進(jìn)行離心收集,1000RPM條件下離心8-10分鐘,去除上清,按凍存數(shù)量加入血清及DMSO,凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
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