mRNA實時定量PCR技術(shù)服務(wù)
mRNA熒光定量PCR/RT-PCR/實時熒光定量pcr/QPCR/熒光定量PCR/PCR
檢測方法：
染料法（SYBR Green I）
探針法（Taqman probe）
實時熒光定量PCR技術(shù)即是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號實時監(jiān)測整個PCR進程，zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR避免了傳統(tǒng)PCR以終產(chǎn)物檢測定量產(chǎn)生的偏差，提高實驗的重復(fù)性。該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化、比較不同組織的mRNA表達差異、驗證基因芯片和siRNA干擾的實驗結(jié)果。
mRNA實時定量PCR技術(shù)服務(wù)流程
1. 設(shè)計并合成Realtime PCR引物
2. 引物溶解后使用Promega的TaqDNA聚合酶進行含SG（SYBR® Green）的PCR反應(yīng)的優(yōu)化。
3. RNA抽提
a. 若實驗對象為組織樣品，取適量（50-100mg）新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品，加1ml的RNA抽提試劑Trizol（Invitrogen），勻漿后抽提RNA。
b. 若實驗對象為細胞樣品，每份樣品取1×106～1×107細胞，*吸去培養(yǎng)液后加1ml的RNA抽提試劑Trizol（Invitrogen），裂解后抽提RNA。
4. RNA質(zhì)量檢測
a. 紫外吸收測定法測定RNA在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，以計算其濃度并評估RNA純度。
b. 使用甲醛電泳試劑（ambion）進行變性瓊脂糖凝膠電泳，檢測RNA純度及完整性。
5. cDNA合成
按照逆轉(zhuǎn)錄酶（Invitrogen或Promega）使用說明將樣品RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。
6. 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(可選)
進行相對定量，需要先將樣品的目的基因以及管家基因進行PCR擴增， 其產(chǎn)物進行梯度稀釋用于做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
7. 實時定量PCR
標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品和待測樣品分別加入到含SG的RealTime PCR反應(yīng)液中（其中TaqBead熱啟動聚合酶來自Promega公司），進行RealTime PCR擴增和檢測
8. 數(shù)據(jù)分析
檢測結(jié)果進行標(biāo)準(zhǔn)曲線分析，以對待測樣品的目的基因進行定量。相對定量實驗需要進一步用樣品的目的基因測得值除以管家基因測得值以校正誤差，所得結(jié)果代表某樣品的目的基因相對含量。
提供實驗報告：包括詳細的實驗方法及實時熒光定量PCR實驗結(jié)果及相關(guān)圖表。
收費標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果：
詳談，我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細的服務(wù)協(xié)議。
【本公司合作項目】
慢病毒，腺病毒，RNAi類，分子生物實驗，病理實驗，免疫學(xué)實驗，細胞實驗，動物實驗，蛋白組學(xué)實驗等，能夠進行藥效學(xué)評價、毒理學(xué)評價、細胞藥篩、動物建模、病理檢測、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、高通量測序、ChIP、CO-IP、生物信息學(xué)分析服務(wù)！
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